PCR實(shí)驗分區(qū)少不了掌上離心機(jī)

發(fā)布時間：

2021-04-08

概要：

掌上離心機(jī)也可以稱為迷你離心機(jī)，用于微量實(shí)驗——PCR實(shí)驗分區(qū)離心。了解PCR實(shí)驗分區(qū)就要先了解氣溶膠，氣溶膠是由固體或液體小質(zhì)點(diǎn)分散并懸浮在氣體介質(zhì)中形成的膠體分散體系，在氣體與液體面摩擦?xí)r，操作時比較劇烈地?fù)u動反應(yīng)管，離心機(jī)離心，擴(kuò)增后PCR產(chǎn)物開蓋時、吸樣時及移液器槍反復(fù)吹吸樣品時都可形成氣溶膠而污染。

　　掌上離心機(jī)也可以稱為迷你離心機(jī)，用于微量實(shí)驗。

　　常見得應(yīng)用有：

　　1、全血中提取血清。

　　2、各種樣品提取上清液。

　　3、樣品快速沉降。

　　4、微量血細(xì)胞分離。

　　5、微生物樣品處理。

　　6、PCR實(shí)驗分區(qū)離心。

　　以最后一個實(shí)驗為例，

　　了解PCR實(shí)驗分區(qū)就要先了解氣溶膠，氣溶膠是由固體或液體小質(zhì)點(diǎn)分散并懸浮在氣體介質(zhì)中形成的膠體分散體系，在氣體與液體面摩擦?xí)r，操作時比較劇烈地?fù)u動反應(yīng)管，離心機(jī)離心，擴(kuò)增后PCR產(chǎn)物開蓋時、吸樣時及移液器槍反復(fù)吹吸樣品時都可形成氣溶膠而污染。

　　綜上所述，為了得到好的實(shí)驗結(jié)果，PCR反應(yīng)需要進(jìn)行嚴(yán)格的實(shí)驗分區(qū)：

　　常規(guī)需要設(shè)置3個獨(dú)立的分區(qū)：試劑耗材儲存與準(zhǔn)備區(qū)、樣品處理和樣品制備區(qū)，擴(kuò)增檢測區(qū)，各區(qū)域空間完全獨(dú)立；實(shí)驗室實(shí)施空氣流向控制，擴(kuò)增前和擴(kuò)增后區(qū)域應(yīng)具有獨(dú)立的通風(fēng)系統(tǒng)，擴(kuò)增后區(qū)域保持負(fù)壓狀態(tài)，其他區(qū)域保持常壓，防止擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)入擴(kuò)增前的區(qū)域。

　　PCR實(shí)驗防止污染的方法：

　　(一)合理分隔實(shí)驗室:將樣品的處理、配制PCR反應(yīng)液、PCR循環(huán)擴(kuò)增及PCR產(chǎn)物的鑒定等步驟分區(qū)或分室進(jìn)行，特別注意樣本處理及PCR產(chǎn)物的鑒定應(yīng) 與其它步驟嚴(yán)格分開。zui好能劃分①標(biāo)本處理區(qū);②PCR反應(yīng)液制備區(qū);③PCR循環(huán)擴(kuò)增區(qū);④PCR產(chǎn)物鑒定區(qū)。其實(shí)驗用品及吸樣槍應(yīng)專用，實(shí)驗前應(yīng)將實(shí) 驗室用紫外線消毒以破壞殘留的DNA或RNA。

　　(二)吸樣槍:吸樣槍污染是一個值得注意的問題。由于操作時不慎將樣品或模板核酸吸入槍內(nèi)或粘上槍頭是一個嚴(yán)重的污染源，因而加樣或吸取模板核酸時要十分小心，吸樣要慢，吸樣時盡量一次性完成，忌多次抽吸，以免交叉污染或產(chǎn)生氣溶膠污染。

　　(三)預(yù)混和分裝PCR試劑:所有的PCR試劑都應(yīng)小量分裝，如有可能，PCR反應(yīng)液應(yīng)預(yù)先配制好，然后小量分裝，-20℃保存。以減少重復(fù)加樣次數(shù)，避免污染機(jī)會。另外，PCR試劑，PCR反應(yīng)液應(yīng)與樣品及PCR產(chǎn)物分開保存，不應(yīng)放于同一冰盒或同一冰箱。

　　(四)防止操作人員污染，使用一次性手套、吸頭、小離心管應(yīng)一次性使用。

　　(五)設(shè)立適當(dāng)?shù)年栃詫φ蘸完幮詫φ眨栃詫φ找阅艹霈F(xiàn)擴(kuò)增條帶的zui低量的標(biāo)準(zhǔn)病原體核酸為宜，并注意交叉污染的可能性，每次反應(yīng)都應(yīng)有一管不加模板的試劑對照及相應(yīng)不含有被擴(kuò)增核酸的樣品作陰性對照。

　　(六)減少PCR循環(huán)次數(shù)，只要PCR產(chǎn)物達(dá)到檢測水平就適可而止。

　　(七)選擇質(zhì)量好的離心機(jī)管，以避免樣本外溢及外來核酸的進(jìn)入，打開離心管前應(yīng)先離心，將管壁及管蓋上的液體甩至管底部。開管動作要輕，以防管內(nèi)液體濺出。

　　PCR實(shí)驗分區(qū)儀器設(shè)備主要有冰箱、超凈臺、加樣器、混勻器、天平和掌上離心機(jī)等，加樣器、天平除了要專用外，還應(yīng)有定期校準(zhǔn)。試劑分裝應(yīng)在超凈臺中進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)混合液應(yīng)使用分子生物學(xué)級的，試劑制備好后應(yīng)有質(zhì)檢：一是否有污染、二是檢測試劑的擴(kuò)增效果。

關(guān)鍵詞：